Métodos analíticos
Qué significa pureza por HPLC
Cómo se calcula un valor de pureza por cromatografía, qué información aporta realmente y qué preguntas conviene hacerse ante un 99 % declarado.
8 MIN · ACTUALIZADO 2026-08-28 · EQUIPO TÉCNICO DE NEXYGEN LABS
El principio del método
La cromatografía líquida de alta resolución separa los componentes de una mezcla haciéndolos pasar por una columna con una fase estacionaria. En el análisis de péptidos se usa habitualmente fase reversa: la fase estacionaria es apolar y la fase móvil es una mezcla de agua y acetonitrilo con un modificador ácido. Cada componente se retiene un tiempo distinto y sale de la columna por separado.
Un detector, normalmente ultravioleta a 214 nm o 220 nm, registra la señal a lo largo del tiempo. El resultado es un cromatograma: una serie de picos, cada uno correspondiente a un componente que la columna logró separar.
Cómo se calcula el porcentaje
La pureza cromatográfica que aparece en un certificado suele ser una pureza por área: el área del pico principal dividida entre la suma de todas las áreas detectadas, expresada en porcentaje. Un valor de 99,2 % significa que el pico principal representa el 99,2 % del área total registrada por el detector en esas condiciones.
Esta cifra es relativa al método. Un gradiente distinto, otra columna u otra longitud de onda pueden dar un número diferente para el mismo material, porque la capacidad de separar impurezas cercanas cambia. Por eso un certificado serio indica las condiciones cromatográficas, no solo el número.
Lo que el método no mide
Un material puede tener 99 % de pureza por área y, aun así, un contenido peptídico neto sensiblemente menor si arrastra humedad o contraiones. Ambas cifras responden a preguntas distintas y ambas son legítimas.
- No mide contenido peptídico neto: el polvo del vial contiene también agua residual y contraiones, normalmente acetato o trifluoroacetato.
- No detecta lo que no absorbe a la longitud de onda utilizada, como sales inorgánicas.
- No identifica las impurezas: solo indica que existen y qué proporción del área representan.
- No sustituye a la confirmación de identidad por espectrometría de masas.
Cómo comparar valores entre lotes
Para que la comparación entre lotes tenga sentido, el método debe ser el mismo. Conviene revisar que el certificado incluya el número de lote, la fecha de análisis, las condiciones cromatográficas y el cromatograma. Un porcentaje suelto, sin cromatograma ni lote asociado, no es información verificable.
En Nexygen Labs cada lote se documenta por separado y el número de lote impreso en el vial es el que permite recuperar su certificado.
Preguntas frecuentes
- ¿Un 99,9 % siempre es mejor que un 99,2 %?
- No necesariamente, si los dos valores provienen de métodos distintos. Solo son comparables cuando se han obtenido con las mismas condiciones cromatográficas y el cromatograma está disponible para revisión.
- ¿Por qué se detecta a 214 nm?
- Porque el enlace peptídico absorbe con fuerza en esa región del ultravioleta, lo que permite detectar cadenas que no contienen aminoácidos aromáticos.
Este contenido es documentación técnica de referencia sobre materiales de laboratorio. Todos los productos de Nexygen Labs se suministran exclusivamente para uso en investigación y no están destinados al consumo humano ni a uso médico, terapéutico, diagnóstico o veterinario.